大肠杆菌来源的DNA合成酶

Klenow Fragment (DNA Polymerase I, Large Fragment) Klenow Fragment(DNA PolymeraseⅠ ,Large Fragment)

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PLA-111 400U×1支 RMB320 -20℃ -

用途

●双链DNA末端的平滑化
●由引物法导入突变
●用随机引物法进行标记DNA探针的制备
●双脱氧法测序

说明

 本酶具有Polymerase活性及较弱的3’→5’Exonuclease活性,利用该性能可用于各种用途。因去除了5’→3’Exonuclease活性,不易受ddNTP的抑制,所以可用于双脱氧法测序反应。


 

原理

参考文献

1)C. C. Richardson et al., J. Biol. Chem., 239: 222(1964)
2)H. Klenow et al., J. Biochem.,22: 371(1971)
3)H. Klenow et. al., J. Biochem.,45: 623(1974)
4)F. Sanger et al., Proc. Natl.Acad. Sci. USA, 74: 5463(1977)
5)J.Sambrook et al., Molecular Cloning(A Laborartory Manual),108, Cold Spring Harbor Laboratory

产品内容

Klenow Fragment (1-10U/μl)


组成:

50mM KPO4 (pH7.0)

0.25mM DTT

50% Glycerol


活性的定义:

以poly(dA) : (dT)合成的co-primer为模板/引物,在37℃、PH值7.4下,在30分钟内将10nmoles的全核苷酸摄入为酸不溶性成分所需的酶量为1U。


来源:

E.coli 重组体


纯度:

10U的本酶和1μg的超螺旋φx174 DNA在37℃下反应4小时,DNA的电泳模式未见变化。


注意事项

稀释本酶虽然不会引起活性下降,但是搅拌有可能使酶活变弱。因此,请尽量避免进行剧烈的Vortex搅拌。


备注

10×Buffer建议由以下组成成分进行制备。


500mM Tris-HCl (pH7.5)

100mM MgCl2 

1mM DTT

500μg/ml BSA

几点建议

●Nick Translation法

本酶无5'→3'Exonuclease活性,与DNA PolymeraseⅠ不同,不能用于Nick Translation法。


●双链DNA末端的平滑化

用本酶进行双链DNA末端的平滑化时,即使利用3'→5'Exonuclease 活性进行平滑化,也应与利用5'→3'Polymerase活性进行平滑化(fill- in)一样,在反应液中加入dNTPs(终浓度50~100μM)。

但是,由于本酶的3'→5'Exonuclease活性较弱,要想消除突出部分进行平滑化,建议使用Blunting high或T4 DNA Polymerase。

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