具有连接DNA片段及Nick部位活性的酶。

T7 Phage来源的耐热性RNA合成酶 Thermo T7 RNA Polymerase (TT7)

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价格表

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TRL-201 7,500U×1支 RMB500 -20℃ -

用途

●高标记RNA探针的制备
●RNA splicing反应前体的制备
●以Cap类似物为引物,制备具有Cap构造的mRNA
in vitro 翻译用mRNA的制备

说明

 Thermo T7 RNA Polymerase是用基因工程学方法对T7 phage来源的RNA Polymerase导入了点突变,提高了耐热性。
相对于野生型T7 RNA Polymerase,提高了耐热性,在高达50℃下仍可进行反应、且在37℃下的比活性也有了提高。


 

实验例

1.热稳定性的比较

将野生型T7 RNA Polymerase在48℃,Thermo T7 RNA Polymerase在50℃条件下进行温育,比较其残余活性。
结果显示,野生型T7 RNA Polymerase在48℃温育5min.后,活性降低为原来的约1/10,而Thermo T7 RNA Polymerase在50℃温育15min.后活性仍未见下降。

50℃时的半衰期
野生型T7 RNA Polymerase <1.9min.
Thermo T7 RNA Polymerase 84.5min



2.高温下in vitro 转录反应

使用野生型 T7 RNA Polymerase与Thermo T7 RNA Polymerase ,比较了各温度下in vitro 转录的活性。
以0.5μg含有T7启动子的质粒为模板,加入RNase Inhibitor 20U和两种酶各25U,在37~51℃的各温度下反应60min.,然后对反应产物进行电泳。


结果显示,Thermo T7 RNA Polymerase 在51℃条件下,仍可进行转录反应。




 

参考文献

1)K. Ishikawa et al., Nucl. Acids Res., 33: e112(2005)
2)M. Itoh et al., Nucl. Acids Res.,30: 5452-5464(2002)
3)M. Chamberlin and J. Ring, J.Biol. Chem., 248: 2235(1973)
4)M. Chamberlin and J. Ring, J.Biol. Chem., 248: 2245(1973)

产品内容

Thermo T7 RNA Polymerase (50U/μl) 150μl

10×Buffer    1ml×2支


组成:

20mM KPO4 (pH7.5)

100mM NaCl

0.1mM EDTA

5mM DTT

0.01% Triton X-100

50% Glycerol


10×Buffer组成:

  400mM Tris-HCl (pH8.0)

  500mM NaCl

  80mM MgCl2 

  50mM DTT


活性的定义:

以T7 DNA为模板,在37℃下,在1小时内将1nmole的[3H]-rNTP摄入为酸不溶性沉淀物所需的酶量为1U。


来源:    

E.coli 重组体


纯度:

25U的本酶和1.5μg的pT7-2 DNA在37℃下反应2小时,DNA电泳模式未见变化。

100U的本酶和2.4μg的[3H]-RNA在37℃下反应2小时,生成的酸可溶性分解物在0.02μg以下。

100U的本酶和1.7μg的[3H]-RNA在37℃下反应4小时,生成的酸可溶性分解物在0.02μg以下。 

基本反应条件

灭菌蒸馏水Xμl

10×Buffer 5μl

10mM rNTPs 2μl

RNase inhibitor 20U

模板DNA 100~1000ng

Thermo T7 RNA Polymerase 25~100U

Total Volume 50μl

37~50℃、30~60min

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