KOD FX
实验例10: 鼠尾裂解液的扩增例

   

使用KOD FX无需对Mouse tail Lysate进行烦杂的抽提即可进行PCR扩增。以下为Mouse tail Lysate的简单配制方法。



Mouse tail的前处理方法」




<注意>
1. 接触热碱性溶液时,请务必十分小心。
2. 推荐将用Proteinase K配制的Lysate直接用于PCRProteinase KSDSPCR反应没有不良影响,无需担心。
请注意,使用时需纯化。
想对Lysate直接进行PCR时,推荐使用上述的『碱裂解法』。










Mouse tail lysate的直接PCR扩增与其他公司产品的比较







PCR条件】

样品:用水将上述方法配制得到的Lysate10倍稀释 
            0.5 μl / 50 μl Reaction
目的片段:Mouse membrane glycoprotein (Thy-1) gene 2.6kb
引物:        Primer#1 :5’-CCACAGAATCCAAGTCGGAACTCTTG-3’
                    Primer#2 :5’-GTAGCAGTGGTGGTATTATACATGGTG-3’ 

<反应条件>
                                                                  终浓度
2x PCR buffer                         25 μl           1×
2mM dNTPs                           10 μl       0.4mM each
10pmol /μl Primer #1           1.5 μl       0.3μM
10pmol /μl Primer #2           1.5 μl       0.3μM
Mouse Tail Lysate                0.5 μl  
KOD FX (1.0U/μl)                   1 μl      1.0 U / 50μl
PCR grade water                10.5 μl
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Total reaction volume            50 μl 

循环条件>

                  94 2min.
                  (98 10sec,68 2.5min.)×30cycles

其他公司产品的PCR该各公司推荐的循环条件进行。




KOD FX全血等粗样品也无需烦杂的前处理,
可直接进行PCR