KOD FX
实验例13: 植物样品(叶・米粒)的PCR扩增例


对于难以直接扩增的植物叶子、精米等,可用简便的一步法配制Lysate,以此为样品,用KOD FX进行扩增。



「前处理方法」




【基因名】 rbcL

【样品】  番茄叶、烟草叶、稻叶、精米

【目的片段长】   1.3 kb

【引物】
Primer F1:5’-ATGTCACCACAAACAGAGACTAAAGC-3’ (番茄叶&烟草叶用)
Primer R1:5’-AAGCAGCAGCTAGTTCCGGGCTCCA-3’ (番茄叶&烟草叶用)
Primer F2:5’-ATGTCACCACAAACAGAAACTAAAGC-3’ (稻叶用)
Primer R2:5’-AAGCTGCGGCTAGTTCAGGACTCCA-3’ (稻叶用)


【样品】 
   94°C  2 min.
   (98°C 10 sec. 68°C 1.5 min.)×30cycles
引物的Tm值未满72的情况下,请用三步法。


PCR组成】


 灭菌蒸馏水                                 10<μl>
   2x PCR Buffer for KOD FX              25
   2mM dNTPs              10 (0.4 mM)
   10 pmol/μl F                          1.5
   10 pmol/μl R                               1.5
   KOD FX (1U/μl)                  1(1U)
   Lysate(一步法)                            1     
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 Total                           50 μl 



【结果】


【评语】
用本方法,以番茄叶、烟草叶、稻叶及精米的Lysate为样品,均可确认到明亮的扩增条带。(该扩增只有在用KOD FX的情况下才能确认到)。用一步法结合KOD FX,即可大大简化植物基因分析的步骤。