KOD FX
实验例27: 使用从人粪便提纯的DNA扩增Helicobacter pylori cagA基因


实验例11:经纯化的人类粪便DNA

                    Helicobacter pylori cagA基因的扩增






【基因名】
Helicobacter pylori cagA



【样品】
QIAmp DNA stool mini kit (QIAGEN)化人粪便得到的DNA



【目的片段长】
239bp



【引物条件】
1st PCR Forward:AACCAATCGTTGATAAGAAYGATAG
1st PCR Reverse:TGTTGATTTTAGAYGGATCKTTTTG



2nd PCR Forward:GAAYGATAGGGATAAYAGGC
2nd PCR Reverse:CKTTTTGAWGRGACACCCAA
KG/T,YC/T,WA/T



【循环】
●A公司 PCR试剂
95 ℃ 10min

(94 ℃ 30sec,50 ℃ 60sec,72 ℃ 30sec)×30Cycles



●KOD -Plus-
94 ℃ 2min

(94 ℃ 15sec,53 ℃ 30sec,68℃ 30sec)×40Cycles



●KOD  FX (1st PCR)
94 ℃ 2min

(98 ℃ 10sec,55 ℃ 30sec,68℃ 30sec)×50Cycles



●KOD  FX (2nd PCR)
94 ℃ 2min

(98 ℃ 10sec,56 ℃ 30sec,68℃ 30sec)×50Cycles





【数据提供】
大阪大学研究生院 医学系研究科
保健学专业 活体信息科学教研室
山本 容正 老师、平井 老师、纪本 老师




【来自老师的评语】
使用KOD FX之前,使用并探讨过好几种酶的条件,但总得不到满意的扩增。
使用了KOD FX,无论是扩增还是特异性都得到了显著的提升。