KOD FX
实验例30: 使用KOD FX的绿脓菌DNA的基因扩增




实验例14:使用KOD FX的绿脓菌DNA的基因扩增








【样品】绿脓菌(Pudomonas aeruginosa K767)的染色体DNA



【基因名PA5471



【目的片段长】约1.5 kbp



【引物序列
Primer F5’-GCTAGAATTCGATCTACCGTTTCAATCACATGGAT-3’
Primer R5’-GATCTCTAGAGGCCACCTCCTCGATTACCT-3’



参考文献
Morita Y, Sobel ML, Poole K.J Bacteriol. 2006 Mar;188(5):1847-55.



反应液组成



<使用KOD FX
PCR grade water**            0.8 μl
2 × PCR buffer for KOD FX     5 μl
2 mM dNTPs              2 μl
4 μM Primer F               0.75 μl
4 μM Primer R                    0.75 μl
模板DNA*                          0.5 μl
KOD FX(1.0 U/ml)               0.2 μl
-------------------------------------------------------------
Total                                  10μl





使用A公司通用酶Taq Base)>
PCR grade water**                           6.16 μl
10 × ExTaq buffer                                 1 μl
10 mM dNTPs                                    0.8 μl
4 μM Primer F                                     0.75 μl
4 μM Primer R                                    0.75 μl
模板DNA                                           0.5 μl
A公司通用酶(5 U/ml)                         0.04 μl
--------------------------------------------------------------
Total                                                       10μl



*5 μg/μl浓度的绿脓菌染色体DNA100倍梯度连续稀释。
**使用DMSO时按终浓度4 %添加DMSO

※其他公司产品按其说明书配制反应液。




PCR循环】
94 ℃ 2 min

94 ℃ 15 sec,60 ℃ 30 sec,68 ℃ 2 min35 cycles
↓                 
68 ℃ 5 min



【结果】





【数据提供】
爱知学院大学药学部微生物教研室
森田 雄二 老师 



【来自老师的评语】
使用KOD FX即便不添加DMSO,也可观察到PCR产物。
添加了DMSO情况下,用KOD FX特异性更高,可观察到非常清晰的条带。