KOD FX
实验例40: 高成功率PCR酶 用KOD FX对指甲直接进行PCR





实验例24: 高成功率PCR酶 用KOD FX对指甲直接进行PCR 








样品



人指甲(约为米粒的1/3大小)





基因名目的片段大小


Human  β-globin 1.3~8.5 kb





引物
1.3 kb β-globin
Forward primer: 5’-TTAGGCCTTAGCGGGCTTAGAC-3’
Reverse primer: 5’-CCAGGATTTTTGATGGGACACG-3’
2.8 kb β -globin
Forward primer:  5’-GCTGCTCTGTGCATCCGAGTGG-3’
Reverse primer:  5’-CCAGGATTTTTGATGGGACACG-3’
3.6 kb β -globin
Forward primer: 5’-GGTGTTCCCTTGATGTAGCACA-3’
Reverse primer: 5’-ACATGTATTTGCATGGAAAACAACTC-3’
8.5 kb β -globin
Forward primer: 5’-TGATAGGCACTGACTCTCTGTCCCTTGGGCTGTTT-3’
Reverse primer: 5’-ACATGATTAGCAAAAGGGCCTAGCTTGGACTCAGA-3’ 






反应液组成



DW

11 (μl)

2×PCR buffer for KOD FX

25

2mM dNTPs 

10

10pmol / μl Primer F 

1.5

10pmol / μl Primer R

1.5

KOD FX (1.0U /μl)

1

Total

50 (μl)





PCR循环条件】



94℃, 2 min

(98℃ 10sec,   68℃  1min./kb) × 35 cycles



【评语】




正如大家所知道的,KOD FX可对全血直接进行PCR,而这次实验直接以指甲为样品,可对8.5 kb大小的片段进行扩增。用本方法可简便地进行基因分型