KOD FX Neo
实验例9:判定 ES细胞的基因重组

数据提供


群马大学先端科学研究指导者养成单位  

山本 正道 老师



样品ES细胞的基因组DNA


样品处理】
ES细胞用蛋白酶K溶解后,用酚/氯仿→氯仿→异丙醇沉淀后溶解TE溶液中。


基因名称】在ROSA26区域中敲入特定的cDNA


的片段长】7011bp


反应条件】
DW                                    11-X  μL
2XBuffer  for KOD FX Neo      25   μL
2mM dNTPs                            10   μL
10 pmol/ml  Primer F               1.5 μL
10 pmol/ml  Primer R               1.5 μL
Template DNA                         X    μL
KOD FX                                   1    μL    
                          50   μL

PCR循环


KOD FX Neo:

※使用其他的试剂时,请按使用说明书的最适条件进行反应



评论


 使用KOD FX Neo时虽然用一般的PCR条件(3-step cycle)就可能检测出来,是如果用step-downPCR条件, 更加明确的检测来。而使用A公司的高效率PCR酶时,虽然这次检测到了,但是之前有时检测的到,有时检测不到。感觉这种情况跟DNA的量及酶量有关。A公司高效率PCR酶的用量需要增加到推荐用量的2.5倍左右才有可能检测到。A公司Long PCR酶完全检测不出来。