一款KOD PCR Master Mix，在保留KOD系列卓越性能的同时进一步实现高速PCR。

高速、高保真、高成功率PCR Master Mix KOD OneTM PCR Master Mix
KOD OneTM PCR Master Mix -Blue-

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TOYOBO

价格表

KOD OneTM PCR Master Mix

Code No. 包装 价格 保存温度 说明书
KMM-101 1 ml ×5支 RMB 2000 -20℃ 产品说明书
KMM-101S 0.25 ml ×1支 RMB 100 -20℃ 产品说明书

KOD OneTM PCR Master Mix -Blue-

Code No. 包装 价格 保存温度 说明书
KMM-201 1 ml ×5支 RMB 2000 -20℃ 产品说明书
KMM-201S 0.25 ml ×1支 RMB 100 -20℃ 产品说明书

用途

PCR

说明

该产品是以改良型KOD DNA polymerase（UKOD）为基础开发的PCR用2× Master Mix，兼具保真性好和扩增效率高的特点。 

使用改进的延伸增强剂技术，可以实现超高速PCR反应:长度在1kb以内的片段仅需1秒， 1~10kb时延伸速度为5秒/kb，10kb及以上延伸速度为10秒/kb。该酶具有很高的反应成功率，针对含肌苷(dI)或尿嘧啶(dU)的引物模板或者粗体样品都能很好地进行扩增。此外，因为预添加了抑制酶活性和3`5`外切酶活性的单抗，可以进行高特异性的热启动PCR。





 

特征

●高速PCR

延伸时间设为1秒即可扩增1kb的片段，10kb以内延伸速度为5秒/kb，高于10kb的片段设为10秒/kb，缩短延伸时间可大幅提高PCR实验的总耗时。 


●简便

除了引物和模板之外的PCR组分都包含在预混液中，简化了配液流程，同时也提高了实验的可重复性。此外，包含电泳指示剂的KOD OneTM PCR Master Mix –Blue-(Code No. KMM-201)可以在PCR反应完成后直接点样，无需另外添加Loading Dye。


●超高的保真性
保真性约为Taq DNA 聚合酶的80倍，保持了KOD系列产品中保真性最高的水准

●粗样品也可高效扩增（实验例2）

●可以使用含肌苷(dI)或尿嘧啶(dU)的引物和模板（实验例5）



 

实验例

1. 高速PCR实验



以人基因组DNA为模板，可进行超快速PCR扩增。结果显示，KOD OneTM PCR Master Mix及KOD OneTM PCR Master Mix -Blue-扩增1 kb以下的目的片段时延伸时间设为1 sec.，1 ~10 kb的目的片段时按5 sec./ kb设定可以得到清晰的扩增条带。




2. 粗样品扩增



使用KOD OneTM PCR Master Mix，比较从血液、鼠尾裂解液（碱裂解液）分别扩增人β-globin基因和小鼠Thy-1基因结果。反应根据各PCR酶推荐条件进行，延伸时间5 sec./ kb。

结果显示，只有KOD OneTM PCR Master Mix能够得到明确的条带。


3. 逆转录反应液（cDNA）的添加量对扩增的影响

逆转录反应液中残留的RNA对PCR有抑制作用，过量添加cDNA模板会使扩增效果变差。KOD OneTM PCR Master Mix不易受RNA的抑制作用。为了确认可引入的cDNA的量，通过加入不同量的cDNA模板，检测扩增TFR基因的效果。与原来的产品及其他公司的产品相比，即使添加较多的cDNA也能得到良好的扩增。





实验例10 酵母基因突变的确认

实验例11：高GC模板 mouse c-Maf cDNA全长扩增

实验例12：小鼠肝脏中ROSA26区域的PCR扩增

实验例13：从原代细胞开始的cDNA克隆

实验例14：基因表达载体间的替换

实验例15：Aspergillus fumigatus flbC 基因缺失株的 PCR 基因分型

实验例16：鸡的基因克隆用样品的制备

实验例17：植物裂解液的扩增

实验例18：腐殖酸抗性的确认

实验例19：通过高速PCR扩增17.5-40kb长片段

实验例4：不同模板量的检测灵敏度比较

实验例5：使用含肌苷的引物进行扩增

实验例6：使用互补引物进行定点突变

实验例7：扩增GC含量在70%或更高的模板

实验例8：哺乳动物细胞用表达载体中重组基因序列的3个碱基突变导入

实验例9：对丝状菌・酵母的直接PCR


 
产品内容

【KMM-101】
Master Mix                1mL ×5支
【KMM-201】
Master Mix（含染料）     1mL ×5支


基本反应条件

灭菌蒸馏水X μl
KOD One PCR Maaster Mix25μl
各引物15pmoles each
模板1～50ng(Plasmid)
10～200ng(Genome DNA)
～750ng[RNA相当](cDNA)
～5μl(粗样品)

Total Volume50μl


〈2步法循环〉*
98℃ 10sec.
68℃ 5~10sec./kb 25～45 cycles

〈3步法循环〉*
98℃ 10sec.
(Tm-5)℃ 5sec.
68℃ 1~10sec./kb 25～45 cycles

延伸时间请根据片段长度进行设定：
1～10 kb:5 sec./ kb
10 kb～:10 sec./ kb

〈Step down循环〉*
98℃, 10sec.
74℃, 1~10sec./kb 5 cycles
↓
98℃, 10sec.
72℃, 1~10sec./kb 5 cycles
↓
98℃, 10sec.
70℃, 1~10sec./kb 5 cycles
↓
98℃, 10sec.
68℃, 1~10sec./kb 15～25 cycles


*基本上以2步法循环进行。引物的Tm值低于68℃或用2步法循环未见扩增时，请试一下3步法循环。另外，扩增10kb以上的目的片段时，如果出现Long PCR片段或非特异条带及弥散，请试一下Step down循环。 ※Tm值采用最邻近法（Nearest Neighbor method）计算得到的值。
引物的Tm值以及扩增产物的Tm值计算请点击此处进入在线工具

几点建议

尽可能使引物长度在25~35mer的范围(Tm>63℃)。

引物的GC含量在45~60%之间，5‘ 端GC含量在60~70%之间，3‘ 端GC含量在40~50%之间以提高扩增的特异性。

高GC或复杂样本请尝试在循环前增加预变性步骤（94℃ 2min）。

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