保真性No.1(与本公司同类产品相比)〔约Taq的80倍〕。最适于克隆。

高效率・高保真PCR酶 KOD -Plus-/ KOD -Plus- Ver.2

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价格表

KOD -Plus-

Code No. 包装 价格 保存温度 说明书
KOD-201 200U×1支 RMB 800 -20℃ 产品说明书

KOD -Plus- Ver.2

Code No. 包装 价格 保存温度 说明书
KOD-211 200U×1支 RMB 1,000 -20℃ 产品说明书

用途

PCR

说明

本产品是以KOD DNA polymerase为基础开发的高保真性

PCR用酶。在本公司的PCR酶中保真性最高。本酶通过

对Buffer组分的改良及采用热启动方法,与原来的产品

KOD DNA polymerase相比,保真性、PCR效率有了

非常显著的提升。KOD -Plus- Ver.2由于对KOD -Plus-

的Buffer进行了进一步的改良,PCR成功率更高。




 

特征

优良的保真性(公司同类产品中为第一)

KOD DNA polymerase的特点是具有非常高的保真性,而KOD –Plus-的保真性有了更大的提高。大约为Taq DNA polymerase的80倍。最适用于克隆。

 

通过热启动提高了PCR反应效率
通过将2种抗KOD单克隆抗体预混在酶中,抑制了常温状态下的多聚酶活性(该活性生非特异性反应的主要原因)和3'→5'核酸外切酶活性。抗体在PCR变性步骤即发生失活,对扩增反应没有任何影响。


延伸性扩增效率的提高
对反应Buffer的组进行了优化,使之较以往的KOD DNA Polymerase延伸性・扩增效率均有很大的提高。


超群的耐热性
因其耐热性比Taq DNA Polymerase更为优良,故可以将热变性步骤的温度设定值提高,对GC含量容易形成高级结构的目的片段尤其适用。


PCR成功率【KOD -Plus- Ver.2
对难扩增的目的片段、长目的片段的PCR成功率比KOD -plus-更高。另外,也降低了带入的逆转录反应液对PCR反应的抑制。


 

实验例

1. 各公司PCR酶的保真性

关于PCR保真性,其他公司PCR酶相比,得知KOD -plus-的保真性最高。

保真性为Taq DNA Polymerase的82


 

2. 与其他公司高保真性PCRPCR扩增性能方面的比较

以Human β-globin基因3.6kb为目的片段,用KOD -Plus-及其他公司的高保真性PCR酶进行扩增并比较
结果可见,其他公司的High Fidelity酶相比较,KOD -Plus-显示了良好的扩增效果



3.用cDNA目的片段与其他公司PCRPCR扩增性能方面的比较

以HeLa total RNA逆转录的cDNA为模板,对4种目的片段进行PCR并比较其效率。
结果可见,与其他酶相比,KOD -Plus- Ver.2显示了良好的扩增效果。特别是对难扩增的6.8kb的目的片段,也能得到明亮的扩增条带。





 

参考文献

1) J. Mo et al., J. Mol. Biol., 222: 925-936(1991)
2) M. Takagi et al., Appl. Environ. Microbiol., 63: 4504-4510(1997)
3) H. Hashimoto et al., J. Biochem.(Tokyo),125: 983-986(1999)
4) H. Mizuguchi et al., J. Biochem.(Tokyo),126: 762-768(1999)
5) H. Hashimoto et al., J. Mol. Biol.,306: 469-477(2001)
6) M. Watanabe et al., J. Biochem.(Tokyo),131: 183-191(2002)
7) H. Terasaki et al., Intl. J. Mol. Med., 9: 107-112(2002)


产品内容

【KOD-201】
KOD -Plus-(1U/μl)* 200μl ×1支
10×PCR Buffer [KOD-2B] 1.0ml ×1支
25mM MgSO4 [KOD-2S] 1.0ml ×1支
2mM dNTPs [NTP-201] 1.0ml ×1支

【KOD-211】
KOD -Plus-(1U/μl)* 200μl ×1支
10× PCR Buffer [KOD-3B] 1.0ml ×1支
25mM MgSO4 [KOD-2S] 1.0ml ×1支
2mM dNTPs [NTP-201] 1.0ml ×1支

*含有1.6μg/μl 浓度的KOD抗体。


组分:
50mM   Tris-HCl(pH8.0)
0.1mM  EDTA
1mM     DTT
50%      Glycerol
0.001%  Tween® 20
0.001%  Nonidet® P-40


活性的定义:
在75℃活性测定条件下,在30分钟内摄入10nmoles的全核苷酸使成为酸不溶物时所需酶的活性定义为1U。


来源:
E.coli 重组体

基本反应条件

〈KOD -Plus-〉
10×PCR Buffer(KOD -Plus-用)5μl
25mM MgSO42μl(1mM)
各Primer 15pmoles each
2mM dNTPs5μl(0.2mM)
模板1〜50ng(Plasmid)
10〜200ng(Genomic DNA)
〜1μl(逆转录反应液)
KOD -Plus-(1U/μl)1μl(1U)

Total Volume50μl



< 3 Step Cycle >*
94℃        2min.
        ↓
94℃        15sec.
Tm-5℃    30sec.

68℃    1min./kb    25〜35 cycles



< 2 Step Cycle >*
94℃        2min.
        ↓
94℃        15sec.

68℃        1min./kb    25〜35 cycles



〈KOD -Plus- Ver.2〉
10×PCR Buffer(KOD -Plus- Ver.2用)5μl
25mM MgSO43μl(1.5mM)
各Primer 15pmoles each
2mM dNTPs5μl(0.2mM)
模板1〜50ng(Plasmid)
10〜200ng(Genome DNA)
〜2μl(逆转录反应液)
KOD -Plus-(1U/μl) 1μl(1U)

Total Volume50μl



< 3 Step Cycle >*   
94℃        2min.
        ↓
98℃        10sec.
Tm-5℃    30sec.

68℃        1min./kb    25〜40 cycles



< 2 Step Cycle >*
94℃        2min.
        ↓
98℃        10sec.

68℃        1min./kb    25〜40 cycles


*通常用3步法进行扩增。

引物的Tm值在72℃以上时,如果用3步法循环出现smear现象,改用2步法循环有时会改善。


※Tm值采用最邻近法(Nearest Neighbor method)计算得到的值。引物的Tm值以及扩增产物的Tm值计算请点击此处进入在线工具

备注

●关于PCR与PCR相关技术、选择DNA Polymerase的指标、各PCR用Polymerase的性质、Exonuclease活性、TdT活性、热启动技术、改良Buffer提高技术性能、trouble shooting等,本公司使用本酶做了的一系列实验例。

如有需求,请跟我们本公司或代理商联系。

※本酶的10×PCR Buffer是本产品专用的。与KOD DNA Polymerase的Buffer组分是不同的。

几点建议

PCR产物的克隆
由于本酶的PCR产物已被平滑化,可用平滑末端克隆法进行克隆。此时,如已对载体进行了脱磷酸化处理,就需要对PCR产物进行磷酸化,或使用带5'磷酸基的引物。 

另外,由于本酶的PCR产物已被平滑化,不能直接进行TA克隆。可使用按以下方法开发的TA克隆专用试剂盒「TArget Clone -Plus-」。


PCR条件的设定
酶的标准使用量为50μl反应体系1U。延伸反应在68 ℃条件下进行,按1kb/1min.的标准。出现拖尾条带时,可降低MgSO4浓度,无法确认到扩增时,可提高MgSO4浓度。

GC含量的模板
在反应液中添加终浓度为2〜5%的DMSO可得到改善。

●以RT反应液为模板的情况
过量带入RT反应液有可能会对PCR反应产生抑制作用。建议带入到PCR的RT反应液在PCR反应液的1/25以下(最好在1/50以下)。这样就无需考虑RT反应液中Mg2+、dNTPs的影响,只要按照基本反应条件添加本酶中添付的dNTPs和MgSO4即可。

●引物的设计
 3'端有错配的引物,可能会受到本酶校正。

FAQ请点击这里

相关产品

(单独销售的组分)

品名 Code No. 包装 价格 保存温度 说明书下载
KOD-Plus-用Buffer KOD-2B 1ml×1支 RMB 50 -20℃ -
KOD -Plus- Ver.2用 Buffer (10×) KOD-3B 1ml×1支 RMB 100 -20℃ -
KOD-Plus-用25mM Mg2SO4 KOD-2S 1ml×1支 RMB 50 -20℃ -
dNTPs Mixture(2mM) NTP-201 各2umoles/1.0ml × 1支 RMB 65 -20℃ -

●KOD系列高效率TA克隆试剂盒

品名 Code No. 包装 价格 保存温度 说明书下载
TArget Clone™-Plus- TAK-201 10次份 × 1支 RMB 380 -20℃ 产品说明书

●使用KOD -Plus-的RT-PCR试剂盒

品名 Code No. 包装 价格 保存温度 说明书下载
ReverTra-Plus-™ PCR-501 100次份 RMB 2,390 -20℃ 产品说明书