用途
PCR
说明
本酶是在Barnes等方法基础上开发的高效率PCR酶。
将具有强3'→5'核酸外切酶活性（proof-reading活性）的KOD DNA polymerase与通过基因工程手段使3'→5'核酸外切酶活性失活的改良型的改变型KOD DNA polymerase以最佳比例混合，从而实现了卓越的PCR性能。
因为是单一酶系(KOD DNA polymerase与Exo(-) KOD DNA polymerase)构成的，所以最适条件、贮存稳定性及热稳定性都是统一的，能够稳定地发挥其性能。
特征
●延伸时间30sec./kb
延伸时间约为Taq DNA Polymerase的一半，最适合于快速PCR。
●优良的PCR反应效率
即便是微量的模板DNA也可进行高效率的PCR，因此除普通PCR外，还适用于菌落直接PCR、病毒/细菌等的检测。
●优良的耐热性
由于耐热性要比Taq DNA Polymerase好，在热变性步骤温度可以设定为很高，对GC-rich等高级结构的目的片段很有效。
●可用于TA克隆
扩增产物可直接用于TA克隆。保真性为Taq的3〜4倍。
参考文献
1) M. Morikawa et al., Appli. Environ. Microbiol., 60: 4559-4566(1994)
2) M. Takagi et al., Appl. Environ. Microbiol., 63: 4504-4510(1997)
3) M. Nishioka et al., J. Biotechnology, 88: 141-149(2001)
4) W. M. Barnes, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91: 2216-2220(1994)
5) H. Kanzaki, J. Bone and Mineral Res., 17: 210-220(2002)
6) H. Nakayashiki et al., Genetics, 153: 693-703(1999)
7) A. Kikuchi et al., Gene, 236: 293-301(1999)
使用本产品发表的文章:
1) H. Sawai et al., Chem. Commun., 2604-2605.(2001)
2) Y. Ogawara et al., J. Biol. Chem., 277(24): 21843-21850(2002)
3) T. Ohbayashi et al., Org. Biomol. Chem., 3: 2463-2468. (2005)
- 产品内容
KOD Dash® (2.5U/μl)100μl
10×Buffer*[LDP-1B]1.2ml
2mM dNTPs[NTP-201]**1ml
*含有终浓度为2mM的Mg2+。
** 用本酶进行PCR时，请使用dNTPs[NTP-201]。其他的dNTPs，有时不能充分发挥PCR性能。
组分:
20mM Tris-HCl(pH8.0)
100mM KCl
0.1mM EDTA
1mM DTT
0.5% Tween® 20
0.5% Nonidet® P-40
50% Glycerol
活性的定义:
在75℃活性测定条件下，在30分钟内摄入10nmoles的全核苷酸使成为酸不溶物时所需酶的活性定义为1U。
来源:
E.coli 重组体
- 注意事项
*酶溶液中虽然含有消防法危险物 第4类 易燃液体 第3石油类 属于水溶性液体的50%的甘油，但是已确认在着火点测试实验中不属于危险物。
- 几点建议
●PCR产物的克隆
基本上无论哪种方法都可进行TA克隆。
可使用高效率TA克隆试剂盒TArget CloneTM等。
●最适用于菌落直接PCR。
由于本试剂是为高效率且快速的PCR而开发的，因此最适用于菌落直接PCR。
另外，再组合使用菌落直接PCR用预混PCR试剂InsertCheck -Ready- ，可进行更简便的菌落直接PCR。
●关于PCR条件的设定
延伸反应以目的片段30sec./kb为基准。
「确认到smear的情况」
可尝试缩短延伸反应的时间或减少酶量。
「GC-rich等容易形成高级结构的模板的情况」
本酶有很高的耐热性，可在96℃以上进行变性反应。
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相关产品
(单独销售的组分)
| 品名 | Code No. | 包装 | 价格 | 保存温度 | 说明书下载 |
|---|---|---|---|---|---|
| KOD Dash用Buffer | LDP-1B | 1ml×1支 | RMB 50 | -20℃ | - |
| dNTPs Mixture(2mM) | NTP-201 | 各2umoles/1.0ml × 1支 | RMB 65 | -20℃ | - |
●KOD系列高效率TA克隆试剂盒
| 品名 | Code No. | 包装 | 价格 | 保存温度 | 说明书下载 |
|---|---|---|---|---|---|
| TArget Clone™ | TAK-101 | 10次份 × 1支 | RMB 300 | -20℃ |
|
●使用KOD Dash®的RT-PCR Kit
| 品名 | Code No. | 包装 | 价格 | 保存温度 | 说明书下载 |
|---|---|---|---|---|---|
| ReverTra Dash® | PCR-401 | 100次份 | RMB 2,200 | -20℃ |
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