可对KOD酶系列扩增的平滑末端PCR产物直接进行克隆。

高效率TA克隆试剂盒 TArget Clone™/TArget Clone™-Plus-

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价格表

TArget Clone™

Code No. 包装 价格 保存温度 说明书
TAK-101 10次份 RMB 300 -20℃ 产品说明书

TArget Clone™-Plus-

Code No. 包装 价格 保存温度 说明书
TAK-201 10次份 RMB 380 -20℃ 产品说明书

用途

普通的TA克隆 TArget CloneTM
●KOD系列扩增得到的平滑末端产物的TA克隆 TArget CloneTM -Plus-
KOD系列扩增得到的平滑末端产物进行加dA反应 10×A-attachment Mix

说明

本品是高效率TA克隆试剂盒。Taq系列酶扩增的PCR产物及KOD系列酶扩增的平滑末端PCR产物均可直接进行TA克隆。Taq、Tth DNA polymerase、Blend Taq®、KOD Dash等酶的扩增产物的3'末端通常带有dA,可直接与T载体连接(→使用TArget CloneTM)。
另外,KOD系列(KOD -Plus-系列以及KOD FX系列)的PCR产物的3'末端基本已被平滑化,PCR产物不能直接进行TA克隆。为了使扩增产物能够进行TA克隆,可使用TArget CloneTM -Plus-,用10×A-attachment Mix在平滑末端添加碱基(主要是dA)。
10×A-attachment Mix中含有对末端添加碱基的Taq DNA polymerase和用来中和反应后残留的KOD的3'→5'Exonuclease活性(校正活性)的抗KOD抗体。



 

特征

●快速・高效率
连接反应最快可在5分钟内完成。

可靠
载体中有LacZ,可进行蓝白斑筛选。

方便
在多克隆位点的两端带有转录用的启动子(T7、T3),可用于转录产物的配制。

可用于平滑末端PCR产物《TArget Clone -Plus-》
在TA克隆试剂盒中添附了『A-attachment Mix』,使用更方便,是KOD系列专用的TA克隆试剂盒。平滑末端PCR产物无需纯化,将其与『A-attachment Mix』混合,只需10分钟即可完成加dA反应。 





 

实验例

使用各类PCR产物比较TA克隆的效率用高保真性酶KOD -Plus-、KOD -Plus- ver.2及Blend Taq,对来自human genome的β-globin基因0.5kb进行PCR扩增。分别用TArget Clone以及TArget CloneTM -Plus-对未经纯化的PCR产物进行TA克隆,连接到pTA2 载体。结果可见,对KOD -Plus-、KOD -Plus- ver.2的扩增产物进行克隆时,使用TArget CloneTM -Plus-,克隆效率可得到大幅度提高。

另一方面对Blend Taq的扩增产物进行克隆时,用TArget CloneTM -Plus-相比,虽然效率有很大下降,但是使用TArget Clone也可以高效率地进行TA克隆。 






 

参考文献

1) H. Mizuguchi et al., J. Biochem. (Tokyo), 126: 762-768 (1999)


产品使用的文献
1) F. Ge et al., Journal of Biochemistry, 143(5): 603-609. (2008)

产品内容

TAK-101】
pTA2 Vector(50ng/μl) 10μl
2×Ligation Buffer 50μl
T4 DNA Ligase 10μl
TAK-201】
pTA2 Vector(50ng/μl) 10μl
2×Ligation Buffer 50μl
T4 DNA Ligase 10μl
10×A-attachment Mix 10μl 

基本反应条件

「TArget Clone」TM

灭菌蒸馏水(3-X)μl

2×Ligation Buffer 5μl

pTA2 Vector (50ng/μl) 1μl

PCR产物Xμl

T4 DNA Ligase 1μl

Total Volume 10μl

室温(15~25℃)、30min.



「TArget CloneTM -Plus-」

KOD酶扩增的PCR产物 9μl

10×A-attachment Mix 1μl

Total Volume 10μl

60℃、10min.

灭菌蒸馏水(3-X)μl

2×Ligation Buffer 5μl

pTA2 Vector (50ng/μl) 1μl

上述处理后的PCR产物Xμl

T4 DNA Ligase 1μl

Total Volume 10μl

室温(15~25℃)、30min.

几点建议

●使用纯化后PCR产物时A-attachment Mix的使用方法

如PCR反应后产生杂带,则需对PCR产物纯化后再使用。纯化后,再添加A-attachment Mix、dNTP、Mg、PCR Buffer和1×浓度的PCR Buffer后再进行反应。

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