以Thermo T7 RNA Polymerase为基础的高效率转录试剂盒。
高效率RNA合成试剂盒 ScriptMAX® Thermo T7 transcription Kit
用途
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●以环状及线性DNA为模板的体外翻译（in vitro translation）反应体系用mRNA的合成 |
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说明
本品是以热稳定性提高的RNA合成酶「Thermo T7 RNA Polymerase 〈〈TT7 〉〉」为基础，RNA合成量大幅度提高的高效率RNA合成试剂盒。
本品中因添加了Accelerator Solution，能得到用原来方法2～4倍浓度的RNA。另外，本品使用了Thermo T7 RNA Polymerase，其热稳定性很高，可在较广的温度范围内进行反应，且37℃时的比活也有了大幅度提高。
特征
●高效率
因添加了Accelerator Solution，与原来的方法相比，能得到2～4倍的RNA量。
●卓越的耐热性
使用了Thermo T7 RNA Polymerase 〈〈TT7 〉〉，与使用野生型T7 RNA Polymerase的试剂盒相比，可在较广温度范围内进行反应。
●最适于无细胞蛋白质合成用mRNA的合成
实验例
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1.与原来方法的RNA合成量的比较 以带有T7 promotor的线性DNA为模板，分别用ScriptMAX® 及A公司的T7 RNA聚合酶进行RNA的合成反应。20μl的反应体系中加500ng的模板，37℃反应2小时。反应后，将合成的RNA在变性条件下用1%TAE琼脂糖凝胶进行电泳检测。结果显示，与原来方法相比，合成效率得到了大幅度提高。 |
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2.各体外转录（in vitro Transcription）试剂盒合成温度与RNA合成量的比较 |
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参考文献
1)K. Ishikawa et al., Nucl.Acids Res., 33: e112(2005)
2)M. Itoh et al., Nucl. Acids Res.,30: 5452-5464(2002)
3)M. Chamberlin and J. Ring,J. Biol. Chem., 248: 2235(1973)
4)M. Chamberlin and J. Ring, J.Biol. Chem., 248: 2245(1973)
- 产品内容
Thermo T7 RNA Polymerase 60μl
10×Basal Reaction Buffer 400μl
5×Accelerator Solution 400μl
25mM rNTPs Mixture 280μl
RNase Inhibitor(40U/μl) 30μl
Nuclease-free Water(not DEPC treated) 1ml
- 基本反应条件
〈Protocol A〉
●线性DNA开始的mRNA合成
●tRNA、rRNA、ribozyme及anti-sense RNA等的大量合成
●RNAi用双链RNA的合成
10x Basal Reaction Buffer 2μl
5× Accelerator Solution 4μl
25mM rNTPs Mixture 4.5μl
RNase inhibitor 0.5μl
Template DNA 0.1-1.0μg
Thermo T7 RNA polymerase 1μl
Total Volume 20μl
↓
37-42℃, 2hr.
〈Protocol B〉
●环状DNA开始的mRNA合成
●RNA探针等特异性较高的RNA的少量合成
10× Basal Reaction Buffer 2μl
25mM rNTPs Mixture 2μl
RNase Inhibitor 0.5μl
Template DNA 1-2μg
Thermo T7 RNA Polymerase 1μl
Total Volume 20μl
↓
37-42℃, 2-4hr.
- 备注
本试剂盒中附带的10×Basal Reaction Buffer与Thermo T7 RNA Polymerase [Code No.TRL-201]中附带的buffer组分是不同的。
- 几点建议
●模板DNA
作为模板的质粒DNA，要使用纯度高的DNA。特别是在质粒抽提中使用RNase的情况时，使用苯酚・氯仿等处理去除RNase，会得到较好的效果。 另外，虽然线性、环状模板都可以用本试剂盒合成RNA，但是转录产物的特征有时各不相同，需要根据RNA的使用目的进行选择。
●反应温度
本品中的Thermo T7 RNA Polymerase与野生型的T7 RNA polymerase相比，在高温区域的活性半衰期变长了。在用比本试剂盒推荐的反应时间(2小时)短的时间进行反应时，采用较高的温度，有时会合成更多的RNA。另外，通过高温反应，模板DNA的立体结构障碍的影响会减少，能够提高RNA的得率。
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高效率T7 RNA Polymerase
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