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高保真･高效率･高速PCR酶 KOD -Plus- Neo

特征  实验例  简要备注  参考文献  价格表  相关产品价格表  改善循环后半段的扩增钝化现象。通过缩短延伸时间(30 sec/kb)实现理想的克隆用PCR。 KOD DNA polymerase具有强力的3’→5’核酸外切酶活性（校正活性），可准确地对目的片段进行扩增，作为克隆用PCR酶获得了广泛的好评。然而，高保真性PCR酶在20〜30循环以后，容易出现扩增无法持续的<停滞现象>。KOD -Plus- Neo在高保真性PCR酶：KOD -Plus-系列技术的基础上，应用了本公司新开发的「延伸增强剂」，保持了KOD -Plus-系列高保真性（约为Taq的80倍）的同时，通过抑制<停滞现象>，明显提高了对微量模板DNA、长目的片段的扩增效率。  【相关产品】最适用于粗样品的高成功率PCR酶「KOD FX」 请点击这里。 用最邻近碱基对法(Nearest Neighbor method)的引物Tm值计算表(EXCEL)的下载请点击这里。

特征

特征1.　可对微量模板DNA进行高保真・高效率的扩增
通过应用延伸增强剂技术，即便是微量模板DNA也可对目的基因进行高保真・高效率的扩增。同时本酶具备高保真性（约为Taq的80倍），可准确地对低拷贝数模板的目的基因进行扩增。
此外，由于使用抗体的热启动法，因此可进行特异性良好的扩增。

特征2.　缩短了延伸时间<30sec./kb>　（长目的片段更方便）
延伸时间从原产品的60sec./kb缩短到30sec./1kb。对长目的片段的扩增更加方便。

特征3.　实现了各种引物同一循环条件
通过对反应Buffer组成的最适化，与原来的KOD DNA polymerase相比，延伸性・扩增效率有了大幅的提升。
实现了无需探讨循环条件。20mer以上的引物(Tm值>63℃)可先尝试2步法。无需探讨非常简便。
*Tm值采用最邻近法(Nearest Neighbor method)计算得到的值。

特征4.　长目的片段的扩增
提高了延伸性，可对各种长度的目的片段进行扩增。已通过实验确认可对24kb的基因组DNA 进行扩增。

实验例

实验例1. 对来自Total RNA的各种基因全长ORF的扩增
实验例2. 微量Template的扩增
实验例3. 各种长度目的片段的扩增效率･延伸性的比较

简要备注

＜几点建议＞
●PCR产物的克隆
由于本酶的PCR产物已被平滑化，可用平滑末端克隆法进行克隆。此时，如已对载体进行了脱磷酸化处理，就需要对PCR产物进行磷酸化，或使用带5'磷酸基的引物。　另外，由于本酶的PCR产物已被平滑化，不能直接进行TA克隆。可使用按以下方法开发的TA克隆专用试剂盒「TArget Clone -Plus-」。

*包含于TArget Clone -Plus-(Code No. TAK-201)中。
**推荐使用Ligation high Ver.2 (Code No. LGK-201)。
 

＜注意＞
●引物的设计
3'端有错配的引物，可能会受本酶校正。

简要备注① 关于Polymerase
应用于PCR的DNA polymerase大致可分为2大类。一类是从嗜热菌中分离出来的被称为polⅠ型的聚合酶，以Taq、Tth　DNA polymerase为代表。另一类是从超嗜热Archaea中分离出来的被称为α型的聚合酶，KOD、Pfu DNA polymerase属于该类。α型酶具有polⅠ型酶所没有的3'→5核酸外切酶活性。该活性被称为Proof-reading（校正）活性，与PCR的保真性有着非常深厚的渊源。KOD DNA polymerase利用该Proof-reading活性，表现出很高的保真性。但具备该活性的酶一般被认为对PCR反应效率有不好的影响。KOD -Plus- Neo通过应用新的延伸增强剂、热启动法、以及Buffer组分的改良，大大提高了PCR效率。

Memo②　什么是热启动？
在室温条件下配制PCR反应溶液时，配制过程中聚合酶会开始反应。在室温下由于引物的特异性降低，很容易产生非特异性反应等副反应。另外，KOD DNA polymerase具有很强的3'→5'核酸外切酶活性(Proof reading活性)，这也是产生副反应的原因之一。热启动法是指在高温阶段，激活聚合酶活性的方法，迄今为止已有好多种方法。其中最严格的是使用中和抗体的方法。
KOD -Plus- Neo中由于混合了两种抗Taq DNA polymerase抗体，在常温状态下可完全抑制聚合酶的活性及校正活性。而该抑制作用在PCR的预变性阶段完全失活，对PCR没有任何影响。 

参考文献

1)M. Takagi et al., Appl. Environ. Microbiol., 63: 4504−4510(1997)
2)H. Hashimoto et al., J. Biochem.(Tokyo),125: 983−986(1999)
3)H. Mizuguchi et al., J. Biochem.(Tokyo),126: 762−768(1999)
4)M. Nishioka et al., J. Biotechnol. 88, 141-149 (2001).
5)H. Hashimoto et al., J. Mol. Biol.,306: 469−477(2001)
6)T. Imanaka, et al. J. Chin. Inst. Chem. Engrs., 32, 277-288 (2001)

价格表

（点击品名即可下载使用说明书。）

品名	包装	保存温度	Code No.	价格
KOD -Plus- Neo	20U×1支      [20次用]	-20℃	KOD-401S	RMB 150
	200U×1支      [200次用]	-20℃	KOD-401	RMB 1,000
	(200U×1支)×5 [1,000次用]	-20℃	KOD-401B	RMB 4,600

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