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价格表

Code No. 包装 价格 保存温度 说明书
QPX-101 1.67mL×3支 (500次份/20μL反应) ￥29,000 -20℃ 产品说明书
QPX-101T 1mL×1支 (100次份/20μL反应) ￥8,500 -20℃ 产品说明书

用途

●RealTime PCR

说明

THUNDERBIRD® Next Probe qPCR Mix是用于TaqMan® probe等序列特异性荧光标记探针及荧光标记引物等各类检测体系的实时PCR用2×浓度预混试剂。由于除ROX（另添）、探针、引物外的成分已预先混合，因此可实现反应液制备的简便化，同时能将样本间的荧光强度差异抑制至最低，获得重复性高的结果。

 本产品通过进一步改良以往产品THUNDERBIRD® Probe qPCR Mix [Code No. QPS-101]的组成，实现了对多重检测及粗样本检测的最优化。此外，也可对应高速PCR循环。


特征

●超宽检测范围

可实现高效且特异性扩增，支持从低浓度到高浓度的全面检测。（实施例1） 

●支持10秒延伸的高速循环

可实现延伸时间为10秒的高速PCR检测。（实施例2） 

●反应液制备稳定性提升

采用独特缓冲液组成，提升了引物-模板混合状态下的稳定性。 

●PCR抑制物存在下的定量性及多重检测性能提升

因同时具备高扩增效率与特异性，即使在PCR抑制物存在下或多重检测体系中仍可高效扩增。

 ●防止Carryover导致的假阳性

本产品含dUTP，通过使用Uracil-DNA Glycosylase（UNG），可防止Carryover导致的假阳性。 

●兼容多种仪器及试剂

支持常规Realtime PCR仪器。此外，可与多种逆转录（RT）试剂组合使用。与本公司RT试剂（ReverTra Ace®系列及SuperPrep®系列）组合使用时，可确认实现更高精度、高灵敏度的表达分析。


实验例

1.GAPDH cDNA的定量

使用荧光色素(FAM)标记的TaqMan®探针进行了GAPDH的检测。实验中使用了源自HeLa细胞Total RNA的cDNA（Total RNA量约0.2 pg～20 ng）。

结果显示，在0.2 pg～20 ng的长范围内确认到了良好的定量性。

图片1.png

 

2. 多重检测系统中常规/高速循环的比较

‌使用4种荧光色素标记的TaqMan®探针的多重检测系统中，针对β-actin、GAPDH、PLA、TUB基因的检测，分别采用「延伸时间30秒的常规循环」及「延伸时间10秒的高速循环」进行了实验。

实验以HeLa细胞Total RNA来源的cDNA（4倍稀释[5梯度]）作为样本，使用Bio-Rad公司CFX96仪器进行分析。

结果显示，即使在扩增困难的多重检测系统中，高速循环仍表现出高的PCR效率。

图片2.png 

3.混合状态下的反应液稳定性测试

使用3种荧光色素标记的TaqMan®探针的多重检测系统中，对痢疾、VTEC、沙门氏菌的基因组DNA进行了检测。

将引物、探针、模板加入PCR反应液后，在避光室温条件下孵育48小时后，按照说明书的循环条件进行了扩增。

结果显示，其他公司产品在48小时后观察到Ct值下降，而THUNDERBIRD® Next Probe qPCR Mix在48小时后仍表现出稳定的性能。

※ΔCt差异在0.5以上及未检测到的情况用黄色高亮显示。

图片3.png 

4.抑制物存在下的多重PCR①

在使用4种荧光色素标记的TaqMan®探针的多重检测系统中，于所记载的抑制物存在下，对β-actin、GAPDH、PLA、TUB基因进行检测确认。 

实验中以HeLa细胞Total RNA来源的cDNA（4倍稀释[5梯度]）作为样本，按照说明书的反应条件，使用Bio-Rad公司CFX96进行了分析。 

比较PCR效率的结果显示，其他公司试剂在添加PCR抑制物时会出现扩增不良的情况，而THUNDERBIRD® Next Probe qPCR Mix即使添加抑制物，效率也未见显著差异。

图片4.png 

5.抑制物存在下的多重PCR②

 

使用3种荧光色素标记的TaqMan®探针的多重检测系统中，进行了痢疾、VTEC、沙门氏菌的基因组DNA检测。另外，作为PCR抑制物，还在添加了粪便、全血、唾液的体系中进行了检测。实验按照说明书的反应条件实施，检测使用Bio-Rad公司CFX96进行。

 

结果显示，其他公司试剂在PCR抑制物存在下或多重检测中无法有效扩增，而THUNDERBIRD® Next Probe qPCR Mix即使含有PCR抑制物，仍可检测到各菌的基因组DNA至10拷贝。

图片5.png

 

6.UNG添加对Carryover的防止效果

 

以肠道病毒RNA为模板，使用含dUTP的RT-PCR试剂对196bp的目标片段进行了扩增。以该PCR产物（10⁴拷贝、10³拷贝）为模板，添加Uracil-DNA Glycosylase(UNG), Heat-labile [Code No.UNG-101]，通过Realtime PCR对与第一次PCR相同的目标进行扩增。

反应条件按照说明书进行。

结果显示，经UNG处理后，第一次的PCR产物被分解，第二次PCR中未检测到扩增。

图片6.png


【产品内容】

【QPX-101T】

THUNDERBIRD® Next Probe qPCR MiX1ml ×1支
50× ROX reference dye 50μL×1支

【QPX-101】
THUNDERBIRD® Next Probe qPCR MiX1.67ml ×3支
50× ROX reference dye  250μL×1支


【基本反应条件】

灭菌水 XμL

THUNDERBIRD® Next Probe qPCR Mix                   10μL

Forward Primer                                                    6pmol*1

Reverse Primer                                                     6pmol*1

TaqMan® probe                                                   4pmol*1

50×ROX Reference dye                                 0.4 /0.04μL*2

UNG*3[Code No:UNG-101]                                         0.4U

DNA样本                                                                        YμL

                                                                                          

Total Volume                                                               20μL


*1 即使同时检测多个目标时，也请使用相同浓度。

*2 50× ROX reference dye，请在通过使用被动参比进行孔间荧光强度及分注误差校正的仪器进行反应时添加。此外，无需校正的仪器无需添加。

*3 UNG处理（可选）：本产品中不包含UNG。此处作为示例列出了使用另售的Uracil-DNA Glycosylase(UNG),Heat-labile [Code No.UNG-101]时的温度条件及反应时间。


(UNG*3反応　20～25℃　10min.)

〈2step PCR〉: 高速

95℃, 20sec.

  ↓

95℃, 5sec.

60℃, 10sec.*

40～45 cycles

*部分仪器延伸长时间无法设置10 sec


〈2step PCR〉: 常规

95℃, 20sec.

  ↓

95℃, 5sec.

60℃, 30sec.

40～45 cycles


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